4-нітрофеніл бета-D-галактопіранозид CAS:200422-18-0

Ефект: ONPG – це субстрат, спеціально використовуваний для виявлення присутності та активності ферменту β-галактозидази. Коли фермент β-галактозидаза присутній та активний, він розщеплює ONPG на два продукти: о-нітрофенол та похідне галактози. Вивільнення о-нітрофенолу призводить до зміни жовтого кольору, що можна виміряти за допомогою спектрофотометра.

Застосування: ONPG має кілька застосувань у дослідженнях молекулярної біології та біохімії:

Визначення активності β-галактозидази: ONPG зазвичай використовується для вимірювання та кількісної оцінки активності ферменту β-галактозидази. Швидкість утворення o-нітрофенолу, яка прямо пропорційна активності ферменту, можна виміряти спектрофотометрично.

Експресія та регуляція генів: ONPG часто використовується в експериментах, пов'язаних з дослідженнями експресії та регуляції генів. Його часто застосовують у аналізах білків злиття, таких як широко використовувана система злиття lacZ, для вивчення експресії генів під контролем специфічних промоутерів. Активність бета-галактозидази, виміряна за допомогою ONPG, дає уявлення про рівень експресії генів.

Скринінг на активність β-галактозидази: ONPG може бути використаний як колориметричний метод скринінгу в технології рекомбінантної ДНК для визначення наявності та функціональності гена LacZ, який кодує β-галактозидазу. Цей метод скринінгу допомагає ідентифікувати клони, що містять потрібний ген.

Дослідження кінетики ферментів: ONPG також корисний для вивчення кінетики ферменту β-галактозидази. Вимірюючи швидкість реакції фермент-субстрат при різних концентраціях субстрату, можна визначити кінетичні параметри, такі як константи Міхаеліса-Ментена (Km) та максимальні швидкості реакції (Vmax).