4-нітрофеніл бета-D-галактопіранозид CAS:200422-18-0

Ефект: ONPG є субстратом, який спеціально використовується для визначення присутності та активності ферменту β-галактозидази.Коли фермент β-галактозидаза присутній і активний, він розщеплює ONPG на два продукти: о-нітрофенол і похідне галактози.Вивільнення о-нітрофенолу призводить до зміни жовтого кольору, який можна виміряти за допомогою спектрофотометра.

Застосування: ONPG має кілька застосувань у дослідженнях молекулярної біології та біохімії:

Визначення активності β-галактозидази: ONPG зазвичай використовується для вимірювання та кількісного визначення активності ферменту β-галактозидази.Швидкість утворення о-нітрофенолу, яка прямо пропорційна активності ферменту, можна виміряти спектрофотометрично.

Експресія та регуляція генів: ONPG часто використовується в експериментах, пов’язаних із дослідженнями експресії та регуляції генів.Він часто використовується в аналізах злитих білків, таких як широко використовувана система злиття lacZ, для вивчення експресії генів під контролем специфічних промоторів.Активність бета-галактозидази, виміряна за допомогою ONPG, дає уявлення про рівень експресії генів.

Скринінг активності β-галактозидази: ONPG можна використовувати як колориметричний метод скринінгу в технології рекомбінантної ДНК для визначення присутності та функціональності гена LacZ, який кодує β-галактозидазу.Цей метод скринінгу допомагає ідентифікувати клони, які містять цікавий ген.

Дослідження кінетики ферменту: ONPG також корисний для вивчення кінетики ферменту β-галактозидази.Вимірюючи швидкість реакції фермент-субстрат при різних концентраціях субстрату, можна визначити кінетичні параметри, такі як константи Міхаеліса-Ментена (Km) і максимальні швидкості реакції (Vmax).