Як визначити оптимальну концентрацію?
Для індуктора IPTG (ізопропіл-бета-d-тіогалактозид) чим вища концентрація, тим краще.Оптимальна концентрація залежить від конкретних експериментальних умов і бажаного ефекту індукції.
Як правило, концентрація ІПТГ використовується в діапазоні 0,1-1 мМ.Нижчі концентрації можуть зменшити несприятливий вплив на ріст клітин і можуть зменшити цитотоксичність через надмірну експресію цільових білків.Вищі концентрації можуть спричинити надмірне метаболічне навантаження на клітини, впливаючи на ріст клітин і ефективність експресії.
Способом визначення оптимальної концентрації може бути оцінка рівня експресії цільового білка шляхом проведення індукційних тестів IPTG при різних концентраціях.Маломасштабні культуральні тести можна проводити з використанням діапазону концентрацій IPTG (наприклад, 0,1 мМ, 0,5 мМ, 1 мМ тощо), а ефект експресії при різних концентраціях можна оцінити шляхом визначення рівня експресії цільового білка (наприклад, Western блот або флуоресцентне виявлення).Згідно з результатами експерименту, концентрація з найкращим ефектом експресії була обрана як оптимальна концентрація.
Крім того, ви також можете звернутися до відповідної літератури або досвіду інших лабораторій, щоб зрозуміти діапазон концентрації IPTG, який зазвичай використовується в аналогічних експериментальних умовах, а потім оптимізувати та налаштувати відповідно до експериментальних потреб.
Важливо відзначити, що оптимальна концентрація може змінюватися залежно від різних систем експресії, цільових білків і умов експерименту, тому найкраще оптимізувати її в кожному конкретному випадку.
Час публікації: 28 вересня 2023 р